导读：
新型冠状病毒（SARS-CoV-2）正在全球蔓延，严重危害人类健康，影响正常生产生活。疫情爆发后，中国着名科学家钟南山院士带领实验室团队第一时间分离出了SARS-CoV-2毒株，并开始着手研究连花清瘟胶囊（LH）对SARS-CoV-2的抗病毒作用及潜在的免疫调节作用，目前已初步阐明LH的抗病毒机制。为中西医结合治疗新冠肺炎提供了依据，让我们一起看看他们的研究成果吧！
摘要
目的
连花清瘟（LH）作为中医复方常被用于治疗流行性感冒，并对一系列流感病毒具有广谱抗病毒作用和免疫调节作用，本研究旨在证明LH对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的抗病毒作用及潜在的免疫调节作用。
方法
LH对SARS-CoV-2的抗病毒作用在非洲绿猴肾细胞（Vero E6）中采用细胞病变效应法(CPE)和空斑减数实验(Plaque reduction assay)测定，LH对病毒形态的作用在透射电镜下观察获得。通过实时定量的PCR检测测定人肝癌细胞（Huh-7）被SARS-CoV-2感染后促炎细胞因子的表达水平。
结果
LH显着抑制SARS-CoV-2在Vero E6细胞中的复制，并且在mRNA水平上明显减少炎性细胞因子（TNF-α，IL-6，CCL-2 / MCP-1和CXCL-10 / IP-10）的表达。此外，经LH治疗后，在细胞内发现异常的病毒形态。
结论
LH可在体外显着抑制SARS-CoV-2在Vero E6细胞中的复制，并具有影响病毒形态和抗炎的作用。这些发现表明LH可以抵御病毒攻击，或成为控制COVID-19病的新策略。冠状病毒是一类有包膜的正向单链RNA病毒，因其冠状外观而得名。除了六种已知的可感染人类的冠状病毒外，目前全球流行的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，与另外两种高致病性冠状病毒SARS-CoV和MERS-CoV一样，SARS-CoV-2也可导致严重呼吸道疾病甚至死亡。人类对这类病毒具有高度易感性，在人群中传播迅速。目前仍没有针对SARS-CoV-2的特异性抗病毒药物，主要采用对症支持治疗（控制症状和预防并发症），寻找特异性抗病毒药物是当务之急。短期内开发针对新型病原体的特异性治疗药物十分困难，而在已知的药物中寻找抗新型冠状病毒的药物或许可行，尤其是在中医药领域中可行性更高。连花清瘟（LH）是治疗呼吸系统疾病的经典中药方剂，是唯一批准用于治疗SARS和流感的中医复方。疫情爆发后，在国家卫健委、国家中医药管理局发布的第四版《新型冠状病毒感染肺炎诊疗方案》中，LH作为经典中药方剂再次被推荐使用。通过对武汉第九医院和华润武钢总医院收治的SARS-CoV-2感染者的临床资料进行回顾性分析，LH可明显减轻COVID-19的症状，缩短病程，但其对冠状病毒，尤其是SARS-COV-2病毒的潜在作用机制仍不清楚。因此，研究LH对SARS-COV-2的抗病毒机制尤为必要。LH的抗病毒作用采用MTT法测定Vero E6细胞经LH/瑞德西韦处理后的细胞存活率，显示LH对SARS-CoV-2具有体外抗病毒作用。CPE检测和空斑减数实验显示LH对SARS-CoV-2的50%抑制浓度（IC50）为411.2μg/ mL(图1 A,C)，通过CPE测定显示瑞德西韦抑制SARS-CoV-2的IC50为0.651μm(图1 B)。 图1 LH和瑞德西韦对SARS-CoV-2的抗病毒作用（C）LH对SARS-CoV-2空斑形成的抑制作用LH对病毒形态的影响电镜下可见细胞质、胞内囊泡、内质网和细胞膜呈现典型的冠状病毒形态 (图2 B, F)。LH（600μg）处理后细胞的病毒表达减少(图2 F,G)。有趣的是，LH处理后病毒形态发生了改变，可观察到细胞表面出现大量的卵形病毒，这与感染细胞的球形病毒不同(图2 H)。 图2 LH对Vero E6细胞中病毒形态的影响（A，E）未感染细胞，（B，F）SARSCoV-2感染细胞，（C，D，G，H）LH处理的感染细胞LH对SARS-CoV-2诱导细胞因子和趋化因子表达的抑制作用高致病性冠状病毒（如SARS-CoV和MERS-CoV）可导致致死性肺炎，这与病毒快速复制、大量炎性细胞浸润和促炎细胞因子/趋化因子表达增多有关。虽然高致病性冠状病毒引起的致死性肺炎的病理生理学尚未完全了解，但最近的研究表明，细胞因子风暴在致死性肺炎中起着关键作用。早期的研究表明,SARS患者血清中的促炎细胞因子明显增多(如IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、IP-10,和MCP-1),并且MERS患者血清中的促炎细胞因子(IFN-γ,TNF-αIL-15, IL-17)也具有同样的表现。通过测定经LH处理后TNF-α，IL-6，CCL-2 / MCP-1和CXCL-10 / IP-10的mRNA表达水平，确定LH对SARS-CoV-2诱导细胞因子和趋化因子表达的抑制作用。结果显示LH对细胞因子和趋化因子的表达具有明显的抑制作用并呈现浓度依赖性(图3)。 图3 LH对受SARS-CoV-2感染的Huh-7细胞中炎症介质的mRNA表达水平的影响A：TNF-α，B：IL-6，C：CCL-2 / MCP-1，D：CXCL-10 / IP-10 自LH问世以来，它作为一种广谱的抗病毒药物在临床上得到了广泛的应用，特别是对各种呼吸道病毒感染。在本研究中，首次证明LH通过抑制病毒复制和减少宿主细胞的细胞因子释放而发挥其抗冠状病毒活性。因此，LH可以单独使用或与现有疗法联合使用来治疗COVID-，中西医结合治疗具有重要价值。 原文信息 Lianhuaqingwen exerts anti-viral and anti-inflammatory activity against novel coronavirus (SARS-CoV-2) in vitro（莲花清瘟对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的体外抗病毒与抗炎机制） 原文作者 Li Runfeng, Hou Yunlong, Huang Jicheng, Pan Weiqi, Ma Qinhai, Shi Yongxia, Li Chufang, Zhao Jin, Jia Zhenhua, Jiang Haiming, Zheng Kui, Huang Shuxiang, Dai Jun, Li Xiaobo, Hou Xiaotao, Wang Lin, Zhong Nanshan, Yang Zifeng 期刊推荐 Editor-in-Chief: E. Clementi CiteScore 5.27 Impact Factor 5.574 扫码了解期刊 扫码阅读原文 点击“阅读原文”，即可浏览全文 爱思唯尔是全球领先的信息分析公司，帮助科学家和临床医生发现新的答案、重塑人类知识并应对最急迫的人类危机。140年来，我们携手全球科研界，管理和验证科学知识。并将这种严谨标准延续到了我们今日新一代的信息平台。爱思唯尔在战略研究管理、研发表现、临床决策支持和专业教育领域提供数字化解决方案和工具，包括ScienceDirect、Scopus、SciVal、ClinicalKey 和Sherpath。爱思唯尔出版超过2500部数字化期刊，如The Lancet《柳叶刀》和Cell《细胞》， 39000多种电子书籍以及诸多经典参考书，如Gray’s Anatomy《格氏解剖学》。爱思唯尔是励讯集团（RELX）的成员之一，励讯集团为全球专业人士和商业客户提供科学、医疗、法律和商业领域信息分析服务及解决方案。更多信息，欢迎访问爱思唯尔中文官方网站： 微信：ElsevierChina 微博：Elsevier爱思唯尔 长按扫码关注我们
